Введение
Сердечно-легочный дирофиляриоз является космополитическим заболеванием, вызываемым дирофиляриями — нематодами, которые поражают главным образом псовых и кошачьих, однако это еще и зоонозная инвазия (причина легочного дирофиляриоза у людей). Заболевание трансмиссивное, т.е. передача паразитов обусловлена наличием специфических переносчиков, что напрямую связано с необходимыми для их развития и выживания климатическими условиями. Первое описание случая сердечного дирофиляриоза собаки было опубликовано в США в «Western Journal of Medicine and Surgery» в 1847 году.

Ранее это заболевание было характерно для стран умеренных, тропических и субтропических районов мира (США, Канада, Южная Америка, Южная Европа, Юго-Восточная Азия, Средний Восток, Австралия и Япония), однако в последние годы выявлена тенденция расширения ареала распространения заболевания за счет регионов с менее теплым климатом. Частью Северного полушария, где дирофиляриоз животных изучен наиболее широко, является Европа. По данным эпизоото- и эпидемиологических исследований, проведенных до 2001 года и с 2002 по 2011 годы, наибольшую распространенность данного паразитоза ранее наблюдали в странах Южной Европы, которые считают исторически эндемичными/гиперэндемичными районами.

На распространение дирофиляриоза могут влиять несколько факторов, таких как перемещение инвазированных животных, появление новых видов комаров, способных выступать переносчиками, расширение ареала обитания переносчиков в связи с изменением климата, вызванного глобальным потеплением, развитие человеческой деятельности в новых районах.

Исследования, проведенные в течение последних 10 лет, свидетельствуют о расширении ареала сердечно-легочного дирофиляриоза у собак в Центральной и Северной Европе. Вполне вероятно, что рост количества диагнозов является следствием возросшего внимания врачей к заболеванию и, соответственно, увеличению количества обследованных животных. С другой стороны, можно предположить и рост экстенсивности инвазии, повторяющий тенденцию, наблюдаемую в Европе в целом.
В России наиболее изученной является Ростовская область, в некоторых районах которой сердечно-легочный дирофиляриоз достигает настораживающих 30,3% от популяции собак (1), есть данные и о 39% (2).

Сведения о диагностированном сердечно-лёгочном дирофиляриозе к нам всё чаще поступают от ветеринарных врачей и клиник и из других регионов РФ, включая Москву, Воронеж, особенно много из Приморского края (Владивостока).

Более того - из анализа литературных данных по территории бывшего СССР и анкетирования врачей России (2) следует, что распространённость сердечного дирофиляриоза намного шире, чем мы представляли до сих пор, а имеющаяся статистика убедительно демонстрирует необходимость включать исследования на D.immitis в протоколы обследования собак не только пациентов с признаками сердечной недостаточности и других симптомов, подлежащих диф. диагностике, но и перед размещением в стационар, как этап диспансеризации, перед приемом в питомник, передержку, гостиницу по всей России, как это уже происходит в некоторых других странах.

Таблица: Распространение Dirofilaria immitis в странах бывшего СССР
Сергей Коняев
Институт систематики и экологии животных СО РАН, Новосибирск, Россия
Ветеринарная лаборатория Vet Union, Москва, Россия
https://zooinform.ru/vete/articles/rasprostranenie-dirofilaria-immitis-v-stranah-by-vshego-sssr/

Стоит отметить, что за последние 4 года частота обращений к проблеме сердечного дирофиляриоза в российской ветеринарии стала выше, но совершенно точно – недостаточной для широкого информирования врачей, заводчиков, владельцев собак и присутствия диагностики HW в ежедневной практике. Но только такие меры - широкое информирование и фокусная практическая диагностика - могут замедлить скорость распространения инвазии D.immitis, одной из самых опасных, тяжело протекающих, патологически снижающей качество жизни пациента и часто заканчивающейся летально.

Все это свидетельствует о необходимости усиления ветеринарного контроля для выявления реального распространения и предотвращения дальнейшей экспансии паразитоза, создания программ обследования и адекватных протоколов дифференциальной диагностики и профилактики дирофиляриоза у животных восприимчивых видов.

Мы особенно обращаем внимание наших читателей на эту проблему, поскольку сталкивались с похожей ситуацией - недостаточным вниманием к необходимости диагностики некоторых заболеваний - в 2010 году, когда начали импортировать экспресс-тесты VetExpert для диагностики вирусной лейкемии и иммунодефицита кошек. Совместно с ветеринарной клиникой Центр (г. Москва) и ВГНКИ мы собирали и анализировали сведения - насколько распространены FIV и FELV в популяции кошек в Москве и регионах, какова информированность врачей и заводчиков и исследованность проблемы. Сегодня у нас есть ощущение дежавю, мы словно вернулись на 12 лет назад, вот только заболевание другое – сердечный дирофиляриоз собак.

Heartworm (HW): Dirofilaria immitis

  • Возбудитель Dirofilariа immitis (сердечные черви, Heartworm, CHW), cемейство Filariidae, класс Nematoda (круглые черви). Живородящие. Длина тела самцов 12…16 см, самок 25…30 см, микрофилярий − 220…290 мкм, диаметр тела микрофилярий сопоставим с размерами эритроцита.

  • Хозяинно-паразитарные отношения Окончательный хозяин − плотоядные млекопитающие: собаки, кошки, болеют все представители семейства псовых (Canidae), многие представители семейства кошачьих (Felidae), хорьки, морские львы и другие животные (всего более 30 видов), известны случаи заражения человека. Один вектор и промежуточный хозяин − кровососущие насекомые семейства Culicidae, родов Aedes, Culex, реже Anofeles.
  • Сезонность Заражение возможно преимущественно в теплый период года, что связано с жизненным циклом промежуточного хозяина; при температуре внешней среды ниже 14°С созревание личинок паразитов в теле комаров практически прекращается, и риск заражения в зимние месяцы даже в южных регионах невысок. Однако в условиях городских домов с теплыми и влажными подвальными помещениями круглогодичный источник инвазии − «подвальные» комары Culex molestus.

  • Путь передачи экзогенный, через кожные покровы.

  • Способ проникновения активный, через раневой канал от укуса комара (подробнее см. в разделе "Жизненный цикл ").

  • Локализация
Взрослые особи: легочная артерия, аорта, каудальная полая вена, сердце
(правый желудочек и правое предсердие, трехстворчатый клапан), имеются
сведения о случаях обнаружения в легких.
Личинки-микрофилярии: кровеносное русло.
Рис. 1 Взрослые D.immitis, пораженное дирофиляриями сердце и фрагмент сердца собаки (ориг., проф. А.М. Ермаков)
Рис. 2 Микрофилярия в мазке крови собаки (окрашивание по Романовскому-Гимзе) (ориг., проф. А.М. Ермаков)

Благодарим за предоставленные фотографии и консультации

по проблеме сердечного дирофиляриоза

Алексея Михайловича Ермакова, д.б.н, проф., декана факультета БиоВетМед ДГТУ.

Жизненный цикл Dirofilariа immitis

  • Комар вместе с кровью инвазированного окончательного хозяина заглатывает личинок Dirofilaria immitis (microfilariae первой ювенильной стадии, L1).
  • В мальпигиевых сосудах комара микрофилярии (L1) превращаются в личинок второй стадии (L2), а затем в L3, которые из пищеварительного тракта выходят в полость тела (гемоцель). Период развития паразитов в организме комара от микрофилярии до инвазионной личиночной стадии (L3) составляет 10-16 дней и зависит от внешних условий. Чем выше температура и относительная влажность окружающей среды, тем этот этап короче.
  • Паразиты стадии L3 с гемолимфой проникают в слюнные железы комара в момент, когда насекомое пронизывает хоботком кожу окончательного хозяина (например, собаки) и выплескиваются вместе с “лужицей” слюны на поверхность кожи. После извлечения комаром хоботка, через образовавшуюся колотую рану L3 проникают в тело окончательного хозяина. С этого момента от 0 до 14 дней проходит до линьки L3 в четвертую личиночную стадию (L4) в окончательном хозяине.
  • Паразиты на стадии L4 мигрируют к базальным мембранам мышц и в подкожную ткань, где в течение некоторого времени находятся в состоянии покоя.
  • После очередной линьки образовавшиеся личинки пятой стадии (L5) мигрируют через стенки кровеносных сосудов в кровоток и пассивно достигают каудальных легочных артерий и сердца окончательного хозяина. Здесь происходит последний этап превращения - L5 во взрослых паразитов, после чего нематоды мигрируют в правый желудочек сердца и легочную артерию (на 85-120 день от момента заражения).
  • В течение следующих двух месяцев черви достигают половозрелости, при наличии червей обоих полов происходит оплодотворение, через некоторое время самки отрождают микрофилярий в кровь хозяина, и начинается новый жизненный цикл паразитов.
Таким образом, препатентный период, т.е. полный жизненный цикл D. immitis − от момента заражения до половозрелой стадии паразитов и воспроизводства микрофилярий − составляет 7~9 месяцев.

Патентный период обусловлен продолжительностью жизни взрослых червей − 5~7 лет.
Предполагают, что инвазионные личинки (L3) в промежуточном хозяине выживают в течение 2-х лет.

Этапы жизненного цикла D.immitis и диагностика

Диагностика возможна только на двух этапах жизненного цикла D. immitis.

  • Этап 5: ИХА и ИФА методы позволяют обнаружить половозрелых самок, присутствующих в сердце больного в количестве не менее 2-х экземпляров, по антигену (собаки и прочие) или антигену и антителам (кошки).
  • Этап 6: ИХА, ИФА, обнаружение микрофилярий микроскопией нативной капли крови и/или модифицированным методом Кнотта.
Имеющиеся в настоящее время методы, основанные на обнаружении антигена сердечного червя, обнаруживают белок, секретируемый главным образом зрелыми самками Dirofilaria immitis (за исключением тестов VetExpert), а наиболее полезные тесты на микрофилярий концентрируют личинок и позволяют идентифицировать вид нематод.

Самый ранний период, в который могут быть обнаружены антиген сердечного червя и микрофилярии, составляет соответственно около пяти и шести месяцев после инвазирования.

Антигенемия (циркуляция антигена в крови ) обычно предшествует появлению микрофилярий, но иногда запаздывает на несколько недель. Антиген вообще не обнаруживают или только спорадически выявляют у собак с очень низкой паразитарной нагрузкой.

Кроме того, антигенемия может быть подавлена примерно в течение девяти месяцев от момента инфицирования у heartworm-положительных собак, принимающих в качестве хемопрофилактики противопаразитарные препараты группы макроциклических лактонов.

Чтобы определить начало периода, в который тестирование будет иметь релевантные результаты, сроки возможного обнаружения инвазии необходимо добавить к приблизительной дате, когда могло произойти заражение.

Разумный интервал - семь месяцев. Таким образом, нет ни необходимости, ни реального обоснования для тестирования собаки на антиген и микрофилярии в возрасте менее семи месяцев. Исключения не составляют и случаи внутриутробного поражения щенков, даже если у матери подтверждён диагноз дирофиляриоз.
Каковы причины провести тест VetExpert на антиген сердечного червя у собаки?
√ Подозрение на инвазию Dirofilaria immitis
√ Обнаружение микрофилярий в периферической крови
√ Кардиологические и/или респираторные симптомы
√ Пребывание в эндемичных районах (в том числе кратковременное путешествие)

Как часто необходима диагностика?
√ Не реже одного раза в год в качестве скринингового теста для каждой собаки старше 7 месяцев.
Обнаружение микрофилярий в крови означает, что пациент болен нематодозом-филяриозом, а заражение произошло не менее чем 7 месяцев назад. Необходимо срочное обследование для уточнения вида паразита, поскольку очень важна быстрая дифференциальная диагностика из-за высокого риска развития необратимых процессов в организме пациента в случае паразитирования D.immitis.

Дифференцировать D.immitis необходимо от нематод еще трех видов: Dirofilaria repens, Dipetalonema (Acanthocheilonema) reconditum, Dipetalonema (A.) dracunculoides – возбудителей нематодозов, не представляющих столь непосредственную угрозу для жизни пациента, как сердечно-лёгочный дирофиляриоз .

В случае однократного инвазирования животного количество паразитов, которые смогут достичь взрослой стадии и заселить сердце, незначительное, поскольку за одно нападение самка комара может поглотить только единичных микрофилярий, а в процессе миграций в организме комара и окончательного хозяина количество паразитов сокращается примерно на 50%, так что выживает не более половины, поэтому при своевременной диагностике в сердце обнаруживают единичных паразитов.

Многократное инвазирование происходит в результате неоднократных нападений зараженных комаров в течение одного или даже нескольких сезонов.

Особенно высок риск быстрого роста интенсивности инвазии при групповом содержании животных в течение нескольких сезонов в непосредственной близости от места размножения и обитания комаров, поскольку очень вероятна многократная передача микрофилярий здоровым животным и повторное заражение больного животного «собственными» филяриями при нападениях одних и тех же самок комаров, срок жизни которых составляет до 43 суток.
  • Частота передачи и распространение дирофилярий, степень тяжести инвазии зависят от факторов окружающей среды, таких как температура, плотность популяции переносчиков, наличие микрофиляриемных собак, которые являются основными резервуарами паразитов.
В процессе переездов, туристических поездок и усыновления питомцев инвазированных собак все чаще перемещают из эндемичных в неэндемичные районы.

Недостаток целенаправленной диагностики, особенно в эндемичных районах, приводит к все более широкому распространению инвазии. Это становится проблемой при отсутствии программной диагностики и профилактики.

Патогенетические факторы

Механический
  • травматизация стенок сосудов хозяина в процессе активной миграции личинок через прямой контакт паразитов со стенками артерий и аорты вызывает изменения эндотелия с развитием ворсинчатой пролиферации;
  • обструкция кровотока живыми или мертвыми паразитами.

Токсический
  • продукты метаболизма паразитов, поступающие в кровь хозяина, оказывают агрессивное воздействие на среды, клетки и ткани.

Формы дирофиляриоза, симптоматика

В патогенезе решающую роль играют нарушение кровотока и развитие хронической правосторонней сердечной недостаточности, развитие эндокардита, миокардита и пролиферативного легочного эндартериита, легочной эмболии и гипертрофии правого желудочка. Также важно развитие кавального синдрома, приводящее к гемолизу, гемоглобинурии, билирубинемии, желтухе, анорексии и коллапсу. Развитие гломерулонефрита обусловлено циркуляцией в кровотоке большого количества иммунных комплексов, образующихся в результате связывания неспецифических и специфических антител с антигеном D.immitis.


Клинические проявления дирофиляриоза связаны с гипертрофией внутренних оболочек и разрушением кровеносных сосудов, что приводит к повышению проницаемости кровеносных сосудов и как следствие - отеку легких, поскольку клеточная инфильтрация вызывает фиброз легких.

Заболевание может иметь острое начало, но обычно начинается с едва обнаруживаемых признаков, возникающих в результате хронической инвазии и накопления физиологических изменений.

Зависят клинические проявления от количества паразитов в организме хозяина. Собаки с единичными паразитами могут иметь очень незначительные клинические симптомы, а при малых физических нагрузках даже никогда не проявить явных признаков поражения.
В случае массированной инвазии воздействие паразитов может привести к развитию эндокардита, легочной гипертензии, тромбоэмболии легочной артерии, дисфункции печени и почек.

Другие возможные последствия - гипертрофия правого предсердия, асцит или гломерулонефрит в результате иммунного ответа. Снижение толерантности, как правило, сопровождается хроническим кашлем и слабостью. Однако у большинства собак сердце и легкие являются основными органами, пораженными сердечными червями с различной степенью выраженности клинических признаков.

Первый симптом, наблюдаемый владельцами – снижение физической активности. На начальном этапе постепенно нарастают симптомы: мягкий глубокий кашель, усиливающийся в процессе или после физических нагрузок; вялость, апатичность, потеря веса, иногда кровь при кашле.

Позже присутствуют симптомы сердечной недостаточности, высока вероятность развития шока, особенно после физических нагрузок (5).

При дальнейшем прогрессировании заболевания развиваются эхокардиографические явления: изменение камер сердца − проявляется расширением правого желудочка и правого предсердия, увеличение конечного диастолического объема и нарушение работы левого желудочка. Возможен выпот в плевральную и/или брюшную полость.

Известны случаи внезапной смерти, например, охотничьих собак во время охоты.

Лабораторные исследования показывают эозинофилию, тромбоцитопению, лейкоцитоз, умеренную анемию, гиперглобулинемию, гипоальбунемию; обнаруживают также изменения на рентгенограмме. В случае массированной инвазии могут развиваться синдром полой вены и одышка, лабораторные исследования выявляют желтуху, гемолиз и гемоглобинурию, билирубинемию (6).

Классификация сердечно-лёгочного дирофиляриоза

по степени выраженности симптомов

Класс 1: Без клинических признаков или возможен мягкий глубокий кашель, усиливающийся в процессе или после физических нагрузок.

Класс 2: Средне-умеренная симптоматика: периодические приступы сердечной и дыхательной недостаточности.

Класс 3: Умеренно-тяжелая симптоматика: вялость, эндокардиты, гломерулонефриты, коагулопатии и т.д., полиорганные нарушения.

Класс 4: Тяжелая симптоматика: отек легких, полисистемные тромбозы, портокавальный синдром, асцит, парез тазовых конечностей, неврологические нарушения т.д.
Большинство собак, инвазированных сердечными червями, можно успешно лечить.

Целью лечения является улучшение клинического состояния животного и устранение всех стадий жизни сердечного червя (микрофилярии, личиночные стадии, молодые и взрослые). Принципиально важно, используя в курсе лечения эдалтициды и микрофилярициды, приложить все усилия для достижения цели при минимальном вредном воздействии лекарств и приемлемой степени осложнений, создаваемых умирающими сердечными червями.

Собаки, инвазированные сердечный червями, не проявляющие никаких признаков или мягкие признаки поражения, имеют высокий уровень успеха лечения. Пациентов с признаками более тяжелой болезни можно успешно лечить, но вероятность осложнений и летальность выше.

Наличие у пациента патологии тяжелой степени в сочетании с другими опасными для жизни заболеваниями может препятствовать лечению сердечно-лёгочного дирофиляриоза.

Собак, проявляющих выраженные клинические признаки, необходимо стабилизировать перед применением эдалтицидов. (антгельминтики против взрослой формы). Это может потребовать применения глюкокортикостероидов, диуретиков, вазодилататоров, положительных инотропных препаратов и инфузионной терапии.

Рекомендации по профилактике, терапии и мониторингу

* Перед эдалтицидной терапией необходимо провести обследование на микрофилярий.
** Прогноз плохой в тяжелой стадии клинических признаков.
*** В классе IY применение эдалтицидов не показано. Лечение хирургическое.

Степень инвазии не всегда коррелирует с тяжестью симптомов, и у собак с большим количеством гельминтов симптомы могут быть незначительными или отсутствовать на ранних стадиях болезни.

Профилактика

Обрабатывать необходимо всех животных в эндемичных районах, начиная с 6-7 месячного возраста, после предварительного обследования на наличие взрослых Dirofilaria immitis и микрофилярий.

Приём антигельминтиков без подтверждённого отсутствия дирофиляриоза опасно из-за высокого риска обструкции артерий обездвиженными или погибшими червями.

ПРИНЦИПЫ ПРОФИЛАКТИКИ, ОСНОВАННЫЕ НА ПАТОГЕНЕЗЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ

1) Обследование
  •  экспресс-тест “VetExpert Heartworm Ag” для выявления антигена половозрелых червей,
  • микроскопия крови для обнаружения микрофилярий; при отрицательных результатах переходим к фармакологической профилактике.

Периодичность повторных исследований в период проведения профилактических обработок – 1 раз в 6 месяцев.


2) Фармакологическая профилактика
Этап 1. Антигельминтики - однократно раз в 3 месяца.
Этап 2. Репелленты, в течение 2-3 мес.
Необходимое количество повторов этапов 1 и 2 зависит от длительности периода возможных контактов с переносчиками – комарами (в большинстве случаев – периода теплого времени года).
Особенности сердечного дирофиляриоза кошек

Использованы материалы, собранные Черновым В.Н.

http://dirovet.info/vet-cat/

Кошки значительно более резистентны к сердечным дирофиляриям и микрофиляриемия у них встречается редко (как правило, менее чем в 20% случаев инвазирования).

В тех же случаях, когда микрофиляриемия всё же развивается, то характеризуется непостоянством и непродолжительностью. Некоторые кошки, по-видимому, могут самостоятельно избавиться от инвазии.
Предполагают, что у таких кошек, возможно, развился сильный иммунный ответ на сердечных червей, который приводит к гибели паразитов. Таким образом, сердечные черви гибнут по причине неспособности к превращениям в организме кошки.

Кошки, как правило, поражены значительно меньшим количеством червей, чем собаки и продолжительность жизни червей короче примерно два-три года, по сравнению с пятью-семью годами жизни особей, паразитирующих у собак.

При экспериментальных заражениях личинками D.immitis у кошек процент нематод, развивающихся во взрослую стадию, значительно ниже (от 0% до 25%) чем у собак (от 40% до 90%).

У кошек эта болезнь не дает типичных симптомов, иногда наблюдают кашель и увеличение частоты дыхания. Несмотря на, казалось бы, легкое течение заболевания, исход зачастую смертельный.

Данные о распространённости дирофиляриоза у кошек, вероятно, занижены вследствие диагностических ограничений, тенденции к эпизодическому проявлению признаков болезни и внезапной гибели без подтверждения заражения.

Считается, что распространённость заражения среди домашних кошек, проживающих в эндемичной зоне, составляет от 5 до 15%, от общего числа заражённых собак.

Специфические гистологические, рентгенографические изменения, в совокупности с характерным клиническим течением дирофиляриоза у кошек, объединяют в отдельный респираторный синдром heartworm-associated respiratory disease (HARD).

У части заражённых животных, несмотря на поражение лёгких, симптомы болезни отсутствуют на протяжении всего срока инвазии. При наличии явных признаков заболевания симптомы развиваются в две стадии:
  1. Прибытие юных дирофилярий в легочные артерии.
  2. Гибель взрослых гельминтов.

Первая стадия синдрома HARD развивается через 3-4 месяца после заражения. Наиболее типичные симптомы — одышка и кашель. Эти ранние признаки заболевания являются следствием острой сосудистой и паренхиматозной воспалительной реакции, возникающей из-за прибытия в лёгкие незрелых гельминтов и последующей гибели большинства из них. Ряд авторов отмечает, что в этот период, заболевание может ошибочно диагностироваться, как “астма кошек”. Помимо сходного течения болезни, симптомы, как и при астме, легко купируются кортикостероидами. Может наблюдаться рвота, острые или хронические неврологические нарушения, иногда анорексия, потеря веса. При наличии периодической рвоты, не связанной с приёмом пищи, у кошки, проживающей в эндемичной зоне, нужно подозревать дирофиляриоз. Ряд других нарушений, таких как асцит, гидроторакс, хилоторакс, пневмоторакс, атаксия, судороги, обмороки были зарегистрированы, однако встречаются редко.

Вторая стадия синдрома HARD обусловлена гибелью взрослых особей паразитов. Разлагающиеся дирофилярии вызывают в лёгких тяжёлый воспалительный процесс и тромбоэмболию. Во многих случаях острое лёгочное поражение обусловлено анафилактической реакцией, которая возникает в ответ на гибель взрослого гельминта. Часто развивается острая тяжёлая дыхательная недостаточность, атаксия, коллапс, судороги, гемоптизис. Развитие второй стадии синдрома HARD нередко становиться причиной внезапной гибели кошки. Средняя продолжительность жизни кошек с симптомами составляет около полутора лет (до момента естественной гибели одного из взрослых паразитов).

Дифференциальная диагностика

Относительно патологий другой этиологии: патологии сердечно-сосудистой, дыхательной систем, хроническая и острая печеночная и почечная недостаточность. При средней и высокой степени инвазии дирофиляриоз приводит к полиорганным нарушениям, поэтому в дифференциальную диагностику следует включать поражения кожи, суставов, нервной системы. Относительно других инвазий: нематодозы, сопровождающиеся микрофиляриемией; инвазии, сопровождающиеся близкой клинической картиной.

Microfilaria: дифференциальная диагностика

Диагностика

Не существует единственного необходимого и достаточного метода диагностики дирофиляриоза, следует осуществлять комплексную диагностику. Набор и последовательность применения методов определена, с одной стороны, патогенезом и циклом развития паразитов, с другой - принятым в медицине алгоритмом диагностики векторных кровепаразитарных инвазий, а также разной чувствительностью методов: микроскопия мазка крови - около 50%, модифицированный метод Кнотта - около 75%, тесты ИХА разных производителей - от 95%.

Исключить из перечня можно микроскопию нативного мазка крови / метод Кнотта, если обследование пациента начали с ИХА и получили положительный результат.

ИХА тесты VetExpert Heartworm Ag для выявления Dirofilaria immitis у собак и других восприимчивых млекопитающих основаны на выявлении как соматического, так и экскреторного/секреторного антигена и самцов, и самок, и их эффективность очень высока (4), другие коммерческие тесты в большинстве случаев основаны на выявлении антигенов секретов половых путей только взрослых самок D.immitis.

Антигены могут быть обнаружены через шесть месяцев после инвазирования.
  • Какой именно антиген выявляют тесты VetExpert Heartworm Ag?
Тесты выявляют белки определенного размера - 14 кДа, что позволяет поставить диагноз инвазии Dirofilaria immitis с минимум 2-мя сердечными червями - самцом, взрослой самкой, неполовозрелой самкой.
Тесты не обнаруживают Dirofilaria repens. Нет перекрестной реактивности тестов VetExpert Heartworm Ag между этими двумя видами. Отсутствуют перекрестные реакции и с другими круглыми червями, в том числе.
Поэтому данные тесты являются высоко результативными для дифференциальной диагностики дирофиляриозов и нематодозов в целом.
Антитела против Dirofilaria immitis у собак недостаточно специфичны, поэтому обнаружение антител не является показательным. У кошек ситуация другая, рекомендовано использовать комбинированные тесты для выявления антител и антигенов (4).
В целом нужно сказать, что именно комплексная диагностика позволяет не только выявить дирофиляриоз, но и определить класс сложности (форму), что в данном случае имеет особенно высокую прогностическую ценность. (таб 2).

I. Микроскопия / microfilaria тест: выявление инвазии по микрофиляриям/микрофиляриемии (рис. 2)
  • В случае положительного результата необходима дифференциальная диагностика, быстрое обнаружение наиболее опасных для жизни пациента возбудителей в процессе врачебного приема.
II. ИХА / антиген тест (собаки), антиген/антитела тест (кошки): выявление и/или дифференцирование инвазии по взрослеющим и взрослым особям паразитов
  • Обследование, начатое с ИХА, подкреплять микроскопией не нужно и наоборот, результаты микроскопии необходимо выверять методом ИХА.
Поскольку иммунная хроматография - это качественный, полуколичественный анализ, результаты следует интерпретировать следующим образом:

Положительный результат теста означает
  • наличие в организме пациента взрослых и/или взрослеющих D.immitis (качественная характеристика): есть вероятность присутствия червей в полой вене и сердечной сумке;
  • интенсивно окрашенная тестовая полоса означает высокую степень инвазии (количественная характеристика): очень высока вероятность присутствия червей в сердце;
Необходимо продолжение обследования пациента инструментальными методами (ЭХО, УЗИ сердца) для установления степени тяжести заболевания.

Отрицательный результат теста на фоне микрофиляриемии означает, что обнаружены личинки не D.immitis, а нематод других видов, сердце не поражено.

Однако, как видим в таблице выше, отрицательные результаты и микроскопии, и ИХА не всегда означают отсутствие инвазии, возможен ложноотрицательный результат в случаях
  • инвазии исключительно самцами,
  • инвазии паразитами обоих полов, но с незрелыми самками D.immitis,
  • незначительной инвазии в случаях активного иммунного ответа организма хозяина.
Поэтому при наличии клинической картины или других оснований для подозрений на дирофиляриоз необходимо продолжать обследование.
Необходимо уточнение рентгеном грудной клетки, диагноз может быть основан на ЭКГ (2).

Фото. Средней степени тяжести дирофиляриоз. Увеличение справа (обратная буква «D») наблюдается при дирофиляриозе. Опубликовано American Hertworm Society; www.heartwormsociety.org

III. Эхокардиография. Рентгенография / визуальное определение интенсивности инвазии и мест локализации половозрелых паразитов
  • Определение класса/формы дирофиляриоза.
  • Разработка курса терапии, прогноз.

IV. ИФА (ELISA) / антиген тест, антитела тест по половозрелым особям, мониторинг состояния в процессе терапии
  • Оценка результативности терапии, коррекция курса лечения.
  • Качественный, количественный анализ, основание для выводов - динамика титров; последовательное понижение титров означает уменьшение количества размножающихся особей, снижение паразитарной нагрузки на пациента, улучшение прогноза.
Показатели достоверности тест-систем
для обнаружения антигенов
Оценить достоверность результатов всех без исключения тест-систем, в том числе экспресс-тестов, дают возможность 3 принципиально важных критерия:

1) Чувствительность (х%)

2) Специфичность (х%)

3) Кросс-реакции (титр)

1. ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ

2. СПЕЦИФИЧНОСТЬ

Показатель чувствительности: выраженная в процентах доля позитивных результатов теста в группе больных животных, диагностированных методом золотого стандарта для конкретного возбудителя.

Показатель специфичности: выраженная в процентах доля негативных результатов теста в группе здоровых пациентов, клиническое здоровье которых подтверждено методом золотого стандарта для конкретного возбудителя.

Для каждого заболевания / возбудителя существует «золотой стандарт диагностики» — наиболее точный диагностический метод, с помощью которого можно установить наличие или отсутствие данного заболевания.

Применение эталонного метода диагностики на практике, как правило, ограничивается его малодоступностью, "неудобствами" — от высокого риска осложнений до стоимости (RT-ПЦР, иммуноблоттинг, ИФА).
Данные клинических испытаний
чувствительности и специфичности
Экспресс-тест VetExpert Heartworm Ag прошел сравнительное исследование положительных и отрицательных образцов, подтвержденных клиническими признаками и методом золотого стандарта для Heartworm Ag: аутопсией.

Образцы сыворотки крови собак, всего 167:
1. Положительные: 65
2. Отрицательные: 102

Подтверждены 3 характеристики достоверности экспресс-теста VetExpert Heartworm Ag по сравнению с методом аутопсии: чувствительность 65/65x100%=100%, специфичность 102/102x100%= 100%, общая точность 100% (167/167).


Табл. Сравнение чувствительности и специфичности разных коммерческих тестов с результатами аутопсии (опубликовано в AAVP, American Association of Veterinary Parasitologists)

3. КРОСС-РЕАКЦИИ

В перечень рабочих характеристик теста VetExpert HW Ag входит отсутствие кросс-реакции с паразитами, переносимыми блохами и вшами, а также возбудителями других заболеваний, подлежащих дифференциальной диагностике. Раскроем этот тезис и обратим внимание на очевидную и неочевидную диф.диагностику.

Одним из принципиально важных этапов разработки тест-систем VetExpert является обеспечение отсутствия кросс-реакций с возбудителями заболеваний, обязательные для дифференциальной диагностики, в клинической картине которых
  • имеются специфические симптомы, общие с сердечным дирофиляриозом (очевидный перечень),
  • имеются неспецифические симптомы, общие с сердечным дирофиляриозом (очевидный и неочевидный перечень),
  • не имеется общих симптомов (неочевидный перечень, преимущественно опасные инфекции, цель - чистота результата и обеспечение эпизоотической безопасности).

Следующая таблица демонстрирует практическое воплощение научной составляющей подхода к созданию высокоточных ветеринарных диагностикумов и ответственности производителя за безопасность продукции, применяя которую в своей практике, ветеринарный врач может быть уверен, что риск принять за дирофиляриоз другую эпизоотию, опасную для пациента и популяции, стремится к нулю.


Данные исследований на кросс-реакции
Мало кто знает, что эта неизвестная или недооцененная врачами («незаметная») квалификационная характеристика методов, основанных на иммунных реакциях антигена и антител, является третьей составляющей достоверности диагностикума, поскольку именно отсутствие или наличие кросс-реакций с другими возбудителями дает «чистоту» результата и уверенность в безопасности.

Вывод: третьим маркером выбора - использовать или не использовать конкретные диагностикумы, поскольку именно отсутствие или наличие кросс-реакций дает «чистоту» результата – служат данные исследований кросс-реакций.


Основные характеристики VetExpert Heartworm Ag
─ Принцип: ИХА прямым сэндвич методом: антитела против Dirofilaria immitis (связывание) <–> Dirofilaria immitis антиген в образце <–>антитела против Dirofilaria immitis (обнаружение)
— Назначение: Выявление антигена Dirofilaria immitis
— Образцы: сыворотка или плазма крови собак
— Время считывания: 5~10 минут
— Чувствительность: 100%
— Специфичность: 100%
— Отсутствуют кросс-реакции с паразитами, переносимыми блохами и вшами, а также другими возбудителями заболеваний, подлежащих дифференциальной диагностике
— Срок хранения: 24 месяца
— Температура хранения: 2~30°C
Особые характеристики VetExpert Heartworm Ag
— Уникальная система антител Canine Heartworm Ag
— Очень высокая точность: 100%
— Очень высокая чувствительность: выявляет инвазию при наличии двух паразитов
— Отличный индикатор для прогноза и коррекции терапии во время лечения зараженной Dirofilaria immitis собаки (ослабление интенсивности окрашивания тестовой линии указывает на сокращение паразитарной нагрузки).
— Увеличивает диагностические возможности, в том числе редких и/или нетипичных для географической зоны, сложных для диагностики и/или ранее не диагностируемых заболеваний, помогает в принятии клинических решений.
— VetExpert Heartworm Ag прошел сравнительное исследование положительных и отрицательных образцов, подтвержденных клиническими признаками и методом золотого стандарта для Heartworm Ag: аутопсией.
— В ходе клинических испытаний подтверждены 3 характеристики достоверности VetExpert Heartworm Ag по сравнению с методом аутопсии: чувствительность =100%, специфичность = 100%, общая точность 100%.
Процедура теста
  1. Поместить цельную кровь в пробирку с EDTA
  2. Закрыть пробирку, оставить до получения сырой сыворотки (не встряхивать) или Закрыть пробирку, 5 раз перевернуть для смешивания крови и EDTA, передать в лабораторию для получения сыворотки или плазмы
3. Внести в лунку 2 капли сыворотки или плазмы
4. Интерпретация через 5~10 минут 

http://www.vetmed.wsu.edu/depts-vcpl/drugs.aspx
Рекомендации по диагностике и терапии
В обследование пациентов на Dirofilaria immitis в обязательном порядке необходимо включать имуунохроматографический анализ на выявление антигена взрослых червей и микроскопическое исследование крови на выявление микрофиляремии.
  • В случае выявления микрофилярий в периферической крови: ИХА тест необходим для дифференциальной диагностики Dirofilaria immitis и Dirofilaria repens.
  • В случае выявления антигена Dirofilaria immitis: исследование на наличие микрофилярий необходимо для оценки тяжести состояния животного, выбора и корректировки соответствующего лечения, прогноза.
Для оценки степени тяжести состояния животного обязательно проведение лабораторных (биохимия, клиника крови, коагулограмма) и инструментальных (рентген, УЗИ, ЭХОкг) исследований (ниже приведена классификация состояний).

Оценка риска тромбоэмболических осложнений. Риск тромбоэмболических осложнений в процессе лечения животного с положительным результатом ИХА - с половозрелыми формами D. immitis - связан с возможной обструкцией кровотока в легочной артерии мертвыми Heartworms.

Низкий риск тромбоэмболических осложнений
Клинические симптомы дирофиляриоза отсутствуют. Данные R-графии грудной клетки в норме. Содержание антигена в крови низкое (тестовая полоса “VetExpert Heartworm Ag” окрашена слабо), либо антиген в крови не обнаружен (тестовая полоса”VetExpert Heartworm Ag” не окрашена - отрицательный результат) при наличии микрофилярий, что означает отсутствие половозрелых червей D. immitis. Выявление микрофилярий в крови при отрицательном ИХА тесте на D. immitis дает право утверждать, что пациент поражен D. repens. При ЭХОКГ паразитов не обнаружено. Возможность ограничить физическую активность собаки имеется.
Показания: Симптоматическая терапия. Микрофилярицидная терапия. Макрофилярицидная терапия

Высокий риск тромбоэмболических осложнений
При наличии хотя бы одного из следующих данных анамнеза и клинического обследования: Клинические симптомы дирофиляриоза имеются - кашель, правосторонняя СН, обмороки, асцит – скопление жидкости в брюшной полости. При R-графии грудной клетки патология выявлена. Содержание антител в крови высокое (тестовая полоса окрашена ярко, по интенсивности окраски приближается к контрольной). При ЭХОКГ обнаружены гельминты. Имеются сопутствующие заболевания – поражение печени, почек, нервной системы, сердечная / дыхательная недостаточность
Показания: Симптоматическая терапия. Микрофилярицидная терапия. Макрофилярицидная терапия при классах поражения 1,2,3. При классе поражения 4 – исключительно хирургическое извлечение паразитов.
Очень важно перед проведением терапии, направленной на уничтожение половозрелых особей, стабилизировать состояние пациента.
В комплексной терапии, направленной на уничтожение имаго и личинок, показано назначение ЛС для уничтожения вольбахий - бактерий, позитивно влияющих на жизнедеятельность дирофилярий.

Микрофилярицидные средства обычно 1 раз в 3 месяца.

Симптоматическая терапия
Подготовка к медикаментозному уничтожению половозрелых особей.
Цель: Ослабление клинических проявлений заболевания.
  • Обычно включает: мочегонные, ингибиторы АПФ, инотропные агенты, антиаритмики.
  • Обычно рекомендуют применять те группы фармацевтических веществ, которые необходимы конкретному пациенту в случае развития симптомокомплексов полиорганных нарушений и секундарных инфекций: кардиопротекторы, антидепрессанты и нейролептики, противомикробные, иммунодепрессанты, противоопухолевые антиэстрогены, стимуляторы дофаминовых рецепторов и др.

Этиотропная / Макрофилярицидная (эдалтицидная) терапия - уничтожение половозрелых особей
Выбор терапии напрямую связан с классификацией состояния пациента, основанной на тяжести проявления клинических признаков, принятой для выбора лечебных мероприятий, доз и схем введения препаратов, для минимизации побочных действий препаратов и токсического воздействия гельминтов.
  • При инвазии низкой и средней степени рекомендована стандартная схема.
  • При инвазии относительно высокой степени рекомендовано двухэтапное лечение (снижает риск тромбоэмболии).
  • При инвазии высокой степени рекомендовано исключительно хирургическое лечение.

БИБЛИОГРАФИЯ

  1. Kartashev V., Batashova I., Kartashov S., Ermakov A., Mironova A., Kuleshova Y., et al. Canine and Human Diroflariosis in the Rostov Region (Southern Russia), Vet. Med. Int., vol. 2011, art. ID 685713, 5 pages.
  2. Коняев С. Распространение Dirofilaria immitis в странах бывшего СССР, Современная Ветеринарная Медицина, № 5/2019.
  3. Fagasiński A. “Diroflaria immitis – narastające niebezpieczeństwo” Magazyn weterynaryjny, vol. 17, No. 137, 2008.
  4. Willard D., Tvedten H., “Small Animals Clinical Diagnostic Laboratory”, Elsevier, 2012
  5. Soulsby E.J.L. „Helminth, Arthropods and Protozoa of Domestical Animal”, Bailliere Tindall I Cassell, Londyn 1968.
  6. Skotarczyk B. “Biologia molekularna patogenów przenoszonych przez kleszcze”, Wydawnictwo Lekarskie PZWL, 2007.
  7. Heartworm Disease (Diroflaria immitis) and Teir Vectors in Europe – New Distribution Trends, Front Physiol. 2012; 3: 196.
  8. Borecka A. “Występowanie zawlekanych gatunków pasożytów u psów na terenie Polski”, Magazyn Weterynaryjny, August 2011, vol. 20, No. 171.
  9. Noszczyk-Nowak A., Janus I., Bielawska J., Nowak M., Sołtysiak Z. ”Pierwszy w Polsce potwierdzony pośmiertnie przypadek infestacji Diroflaria immitis u psa”, Weterynaria w Praktyce vol.11, No. 6/2014.
  10. Hagio M. “Two-diamensional echocardiography for the detection of Diroflaria immitis in the right heart and adjacent vesselsof the dog”, Journal of the Japanese Veterinary Medical Association, No. 39, 1986.
О компании ВетЭксперт
Более 11 лет в России
Тесты VetExpert на рынке РФ более 11 лет, на рынке Европы более 13 лет
Уникальная точность
Все тесты имеют высочайшие показатели чувствительности и специфичности
Свыше 500 000 диагнозов!
С помощью наших тестов в России поставлено более 500 тысяч диагнозов – выиграно драгоценное время и спасено огромное количество жизней!
Выдающаяся логистика
Мы обеспечиваем сохранение высочайшего качества товаров при транспортировке и пересечении границ, хранении на складах и доставке
Большая сеть партнеров
Сегодня с нами более 1000 клиентов, нам доверяют ведущие ветеринарные клиники и врачи России
Соответствие законодательству
Мы предоставляем соответствующие законодательству РФ «Декларации о соответствии» на всю продукцию, абсолютно легально осуществляем ввоз товаров через границу, обеспечивая защищенность наших партнеров при государственных проверках
Более 600 ветеринарных клиник
доверяют диагностическим тестам VetExpert. Пожалуйста, позвольте нам рассказать вам о наших преимуществах!
Запишитесь на ПЕРСОНАЛЬНУЮ бесплатную презентацию!

На ней вы узнаете: Как экспресс-тесты помогают ветеринарным клиникам зарабатывать больше? На чем основаны экспресс-анализы VetExpert и как именно мгновенно интерпретировать результаты, не запоминая множества визуальных комбинаций? Какие тесты являются наиболее востребованными именно в вашем регионе и многое другое!

Нажимая на кнопку, вы даете согласие на обработку персональных данных и соглашаетесь c политикой конфиденциальности
Подпишитесь на рассылку и получите в первом письме алгоритмы диагностики сложных заболеваний кошек и собак методом ИХА
«Нажимая на кнопку, вы даете согласие на обработку персональных данных и соглашаетесь c политикой конфиденциальности»
Made on
Tilda