VetExpert: помощь в диагностике инфекций и инвазий каждый день

Вы заботитесь о пациентах, мы заботимся о вас

СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МЕТОДА
ИММУННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
И МЕСТО ИХА В ВЕТЕРИНАРНОЙ ПРАКТИКЕ
Если вы не найдете здесь то, что искали, напишите нам, и мы постараемся предоставить необходимую информацию.

АЛГОРИТМ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
РАЗНЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ,
ОСНОВАННЫХ НА ПРИМЕНЕНИИ ТЕСТ-СИСТЕМ

ОСОБЕННОСТИ РАЗНЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ, ОСНОВАННЫХ НА ПРИМЕНЕНИИ ТЕСТ-СИСТЕМ
Введение
Обнаружить возбудителей инфекций и инвазий в организме пациента, в его секретах и экскретах возможно при помощи специальных иммунных методов: Иммунохроматографического анализа (ИХА), Иммуноферментного анализа (ИФА), Полимеразной Цепной Реакции (ПЦР).

Процесс исследования иммунными тест-системами заключается в выявлении в биологическом материале либо антигена - специфичного белка возбудителя (ИХА, ИФА), либо специфичных антител, которые вырабатывает организм в ответ на появление конкретного возбудителя (ИХА, ИФА), либо консервативных участков генома , т.е. ДНК или РНК возбудителя (ПЦР).

Методы ИХА и ИФА используют для диагностики не только инфекций, но и инвазий, например, для выявления кровепаразитов или сердечных червей, поскольку применяемая при таких инвазиях микроскопия не только малоэффективна сама по себе, но и отбор биологического материала для исследования нередко представляет значительный риск для пациента.

Сравним несколько диагностических методов, используемых в практической ветеринарии (и медицине), основанных на применении тест-систем для обнаружения антигенов и антител или участков генома.

В основе этих методов лежат тест-системы разных производителей, отличающиеся показателями достоверности (специфичность, чувствительность, наличие-отсутствие кросс-реакций с другими возбудителями), прочие отличия касаются типов устройств, в которых осуществляется работа тест-системы, количеством этапов исследования, стоимостью оборудования и сложностью подготовки персонала, мобильностью и т.д.
ИХА
ИммуноХроматографический Анализ
  • Тип устройства – индивидуальная тест-кассета с набором компонентов.
  • Метод - иммунохроматографический анализ (ИХА): обнаружение антигена или антител в биологическом материале.
  • Тип анализа – качественный, полуколичественный: регистрирует титры антигена или антител, соответствующие наличию патологического инфекционного или инвазионного процесса в организме; количественный: регистрирует титры антител, соответствующие низкому, среднему или высокому уровню и иммунного статуса.
  • Универсален: предназначен для работы в кабинете приема, вне клиники (на выезде к пациенту), в лаборатории вне зависимости от оснащенности.
  • Длительность выполнения исследования: 5...10 минут для тестов на антиген или 5...20 минут  для тестов на антитела при комнатной температуре не ниже +15°C.
  • Оценка результата - визуальная.
  • Специальной подготовки врачей и персонала лабораторий не требует, достаточно точного следования инструкции.
  • Влияние внешних факторов на достоверность результата: методика разработана таким образом, что на тест-реакцию при соблюдении температурного режима исполнения анализа не влияют никакие другие факторы; если окружающая температура и температура компонентов набора и образца отличается от рекомендованной в инструкции, то необходимо учитывать, что в диапазонах ниже +2°C или выше +30°C возможно искажение результата, а в диапазоне от +2°C до +15°C возможно относительное замедление реакции.
ИФА: ELISA
ИммуноФерментный Анализ
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
  • Тип устройства – многолуночный планшет с набором компонентов.
  • Оборудование: а) полуавтоматический анализатор, термостат, качалки; б) автоматический анализатор.
  • Метод - иммуноферментный анализ (ИФА): позволяет обнаружить антиген или антитела в сыворотке или плазме крови.
  • Тип анализа - количественный: результат - числовое значение титра антигена или антител. Обязательно наличие лаборатории и специального подготовленного персонала.
  • Длительность выполнения исследования: 2...5 часов.
  • Оценка результата: для адекватной интерпретации полученных из лаборатории результатов анализа врачу необходимо пройти специальную подготовку.
  • Влияние внешних факторов на достоверность результата полифакторное: температура, влажность, освещенность, качество воды, используемой для разведения буфера, наличие окислителей в окружающем воздухе, условия инкубации; очень важна точность исполнения каждого этапа исследования.
ПЦР-диагностика
Полимеразная Цепная Реакция
  • Тип устройства – анализатор; реагенты необходимо приобретать по мере расходования.
  • Оборудование основное - амплификаторы, дополнительное - флуоресцентные детекторы, устройства для проведения электрофореза.
  • Метод - полимеразная цепная реакция: обнаружение антигена в любом биологическом материале.
  • Тип анализа - качественный: регистрирует наличие в пробе ДНК или РНК определенного возбудителя вне зависимости от его титра и жизнеспособности, в том числе в очень малой концентрации.
  • Длительность выполнения исследования: несколько часов.
  • Оценка результата: визуальная, по флуоресцентным меткам.
  • Обязательно наличие отдельного помещения и стерильного бокса в лаборатории, а также специально подготовленного персонала.
  • Влияние внешних факторов на достоверность результата: при нарушении требования стерильности помещений ПЦР-лаборатории и одежды персонала очень высока степень вероятности ложноположительных и ложноотрицательных результатов, обусловленная контаминацией проб.
Организация и использование результатов требует хорошего знания особенностей метода ПЦР-диагностики. (ссылка на раздел Особенности ПЦР-диагностики)
rt-ПЦР-диагностика
Полимеразная Цепная Реакция
в реальном времени (real time)

  • Тип устройства – анализатор; тест-системы необходимо приобретать по мере расходования. Оборудование: амплификаторы со специализированным программным обеспечением и флуоресцентным детектором.
  • Метод - полимеразная цепная реакция в реальном времени: обнаружение антигена в любом биологическом материале.
  • Тип анализа: количественный: регистрирует количество определенного антигена в пробе вне зависимости от его титра.
  • Длительность выполнения исследования: несколько часов.
  • Оценка результата: автоматическая регистрация и интерпретация полученных данных. Обязательно наличие оснащенной лаборатории и специально подготовленного персонала.
  • Влияние внешних факторов на достоверность результата: при нарушении требования стерильности помещений ПЦР-лаборатории и одежды персонала очень высока степень вероятности ложноположительных и ложноотрицательных результатов, обусловленная контаминацией проб.
Made on
Tilda