---------- Ответы на вопросы ----------

Ответы на распространенные вопросы

Вопрос 1: В каких случаях экспресс-тесты лучше других методов?

Ответ: Даже при том, что экспресс-тесты VetExpert не более чувствительны, чем ПЦР (иногда ПЦР демонстрирует ложноположительные результаты), этот метод очень удобен для ветеринарного врача, поскольку позволяет быстро и без трудоемких методик поставить точный диагноз. Это научный инструмент, помогающий врачу сделать правильное заключение об этиологии заболевания.

Вопрос 2: Как оценить результат, если тестовая полоса окрашивается менее интенсивно, чем контрольная. Считать его положительным или нет? Так часто бывает с тестами на коронавироз и иммунодефицит.

Ответ: Интенсивность окрашивания тестовой полосы зависит от титра (концентрации) антигена или антител в исследуемом образце. Экспресс-тесты характеризуются определенным порогом чувствительности, т.е. способны выявлять АГ и АТ в концентрации, свидетельствующей о заболевании (патологическом процессе), поэтому показания к применению экспресс-тестов - это клинические проявления заболевания.

Контрольная полоса всегда окрашивается ярко, поскольку хромоген в составе тест-кассеты присутствует в избыточном количестве. О положительном результате свидетельствует окрашивание тестовой полосы (любой интенсивности). Яркая тестовая полоса свидетельствует о высокой концентрации АТ или АГ в исследованном образце. Для таких заболеваний как иммунодефицит или коронавирус характерно присутствие АТ или АГ в относительно невысокой концентрации ( из-за сложного патогенеза этих заболеваний), по сравнению, например, с титром антигена, характерного для острой формы парвовироза или панлейкопении, при которой можно увидеть тестовую полосу, окрашенную так же интенсивно, как и контрольная (свидетельствующая только о работоспособности тест-кассеты).

Вопрос 3: У собаки в крови при микроскопическом исследовании на пироплазмоз обнаружены микрофилярии. Проведенное тестом VetExpert Heartworm Ag исследование на дирофиляриоз показало отрицательный результат. В чем причина?

Ответ: Если методика выполнения теста не нарушена (контрольная полоса окрашена), мы встретились с классическим случаем использования тестов VetExpert для дифференциальной диагностики.

Микрофилярии - личинки нематод не одного, а нескольких видов. Самые опасные - Dirofilaria immitis, их называют Heartworm (сердечные черви), поскольку взрослые особи именно этого вида поражают легочные артерии.

Прочие нематоды, микрофилярии которых могли быть обнаружены при микроскопии крови: Dirofilaria/Nochtiella repens (поражают подкожную клетчатку); Acanthocheilonema reconditum и Acanthocheilonema dracunculoides (подкожная клетчатка, брюшная полость, околопочечная жировая клетчатка). Тест VetExpert Heartworm Ag выявляет антиген только Dirofilaria immitis (специфичность 100%) .

Антиген всех прочих гельминтов VetExpert Heartworm Ag выявить не может, однако эти прочие и не так опасны для зараженных животных, поскольку не поражают ни сердце, ни артерии. Микроскопии для постановки диагноза и разработки схемы терапии обычно достаточно (применяют Стронгхолд или Ивермектин, например).

Вопрос 4: Может ли тестовая полоска (свидетельствующая о положительном результате) исчезнуть через несколько часов после проведения теста?

Ответ: Положительный результат теста не может смениться на отрицательный. С течением времени интенсивность окрашивания тестовой полосы может измениться: окрашивание становится менее интенсивным (полоса бледнеет). Польностью исчезнуть окрашивание не может.

Окрашивание в ходе теста - это результат образования иммунных комплексов, в состав которых входит хромоген (золото). Иммунные комплексы с хромогеном фиксируются в зоне тестовой полосы за счет соединения с антител (или антигена) с антигенами (или антителами), стабильно адсорбированными на мембране. Интенсивность окрашивания может снижаться вследствие высыхания мембраны. Для обесцвечивания окрашенной полосы высыхания недостаточно, требуется разрушение иммунных комплексов, что возможно, но для этого необходимо дополнительное химическое воздействие извне. Следует отметить, что свидетельством такого воздействия будет обесцвечивание не только тестовой, но и контрольной полосы мембраны.

Вопрос 5: Можно ли проводить диагностику тестом VetExpert, если животному ввели сыворотку или иммуноглобулин против искомого заболевания?

Ответ: После введения сыворотки или иммуноглобулина против искомого заболевания можно проводить диагностику, используя тест VetExpert на антиген (Ag).

Тесты на антитела (Ab) использовать нельзя в течение 15-30 суток с момента инъекции, поскольку в течение этого времени в крови животного присутствуют введенные искусственно специфические антитела против искомого инфекционного или инвазионного агента.

Вопрос 6: Какой метод лежит в основе экспресс-тестов VetExpert?

Ответ: Принцип работы экспресс-тестов VetExpert - хроматографическое иммунологическое исследование. Связывание антигена или антител на мембране позволяет быстро выявить специфические антигены или антитела. Этот метод используют, в частности, для идентификации различных вирусов и бактерий. Тестируемый биологический образец смешивается с соответствующим материалом на пластине, смесь под воздействием капиллярных сил продвигается вдоль мембраны, на которой антигены или антитела образца вступают в реакцию со связывающими их компонентами. Контрольная линия показывает, работает ли тест должным образом. Очень важны Метод потока буферного раствора и Специфические материалы, связывающие антиген вируса или антитела.

Специфические материалы: моноклональные антитела, поликлональные антитела, межвидовые антитела, рекомбинантные антигены.

Вопрос 7: Почему ваши тесты называются одношаговыми? Какие еще есть?

Ответ: Экспресс-тесты VetExpert называют одношаговыми по сравнению, например, с двухшаговыми устройствами для экспресс-диагностики.

Одношаговый экспресс-тест: поскольку все иммунореагенты находятся в составе тест-кассеты, выполнение исследования состоит из одного шага-этапа - внесения образца в виде смеси пробы биологического материала и аналитического раствора или последовательного внесения образца и аналитического раствора.

Двухшаговый экспресс-тест: процесс тестирования состоит из двух шагов-этапов: 1) внесение подготовленного образца (смеси пробы биологического материала и аналитического раствора), 2) активация промывочного реагента. От экспресс-тестов VetExpert такие устройства отличаются еще следующими особенностями: промывочный реагент и аналитический разбавитель таких экспресс-систем высоко чувствительны к температурному фактору, с чем связаны жесткие требования к условиям хранения и транспортировки набора (при температуре +2..+8оС), ограничения в применении вне клиники и более значительные затраты времени на исследование (поскольку наборы всегда необходимо хранить в холодильнике, перед применением их выдерживают при комнатной температуре в течение не менее 30 минут).

Вопрос 8: Если тест проведен при температуре ниже 2 или выше 30 градусов, это может привести к ложному результату?

Ответ: Да, слишком низкая или высокая температура могут исказить результат.

Вопрос 9: Если тесты хранили в холодильнике, через какое время после извлечения их можно использовать?

Ответ: Перед началом работы все компоненты набора и используемые образцы должны быть одинаковой комнатной температуры. Охлажденные тесты, не нарушая целостность индивидуальной герметичной упаковки из фольги, необходимо выдержать при комнатной температуре не менее 1 часа. Поэтому мы рекомендуем заранее извлекать из холодильника тесты, предназначенные для работы в течение дня, если температура в комнате не выше 30оС. Это правило касается всех компонентов набора.

Вопрос 10: Можно ли хранить тесты в холодильнике?

Ответ: Тесты VetExpert нельзя подвергать воздействию температуры ниже +2оС. Оптимальные условия хранения: защищенное от прямых солнечных лучей место, при температуре от +2оС до + 30оС. Хранить тесты в холодильнике можно, если температура в нем выше +2оС.

Вопрос 11: В течение какого времени можно считывать результат?

Ответ: Мы рекомендуем интерпретировать результат в интервале от 5* до 10 минут от начала работы теста. Позднее отрицательный результат может измениться на положительный (но не наоборот - положительный не изменится на отрицательный). В таком случае мы рекомендуем провести повторный тест через 2-3 дня, поскольку это, все же, может быть связано не с нарушением времени считывания результата, а с низким титром вируса или антител в организме пациента на момент теста.

Более длительная экспозиция - до 20 минут - нормальна, если температура в помещении ниже +15оС.

* Если через 1 минуту после внесения в лунку образца и буферного разбавителя цвет не появился, - нужно добавить также в лунку еще одну каплю аналитического раствора.

Вопрос 12: Почему не окрасилась линия контроля?

Ответ: Это явление встречается, когда скорость вытекания буфера из пипетки или флакона слишком высока. Буфер должен поступать на мембрану постепенно - капельно (Метод потока), поскольку поступающий единовременно в большом объеме буфер слишком быстро мигрирует по мембране, минуя "золотой" сектор (сектор мембраны с конъюгатом нанноколлоидного золота). В результате линии С и Т могут быть S - образной формы или не проявляются, или слишком бледны. Все капли аналитического разбавителя пробы необходимо добавлять по одной и последовательно. Рекомендация из практики: 1 капля - интервал, соответствующий счету "раз-два-три" - 2 капля - интервал "раз-два-три" - и т.д.

Вопрос 13: Почему при наличии симптома у собаки результат теста был отрицательным?

Ответ: Практически не существует однозначного уникального симтома конкретного инфекционного заболевания, поэтому в подавляющем большинстве случаев для постановки диагноза необходима дифференциальная диагностика по ряду заболеваний, для которых характерен данный симптом.

Вопрос 14: Что такое чувствительность теста?

Ответ: Показатель чувствительности теста - это доля позитивных результатов в группе больных животных. Производитель тестов BioNote Inc. получает данные о чувствительности в сравнении с другими методиками. Для каждого заболевания существует "золотой стандарт диагностики" - наиболее точный диагностический метод, с помощью которого можно установить наличие или отсутствие определенного заболевания. Как правило, использование эталонного метода диагностики в практической ветеринарии ограничивается неудобством применения, риском осложений у пациента, высокой стоимостью и т.п.

Вопрос 15: Что такое специфичность теста?

Ответ: Специфичность теста - это доля негативных результатов теста в группе здоровых пациентов. Производитель тестов VetExpert получает показатель специфичности по каждому тесту в сравнении с "золотым стандартом диагностики" (наиболее точный диагностический метод, с помощью которого можно установить наличие или отсутствие определенного заболевания). Чем специфичнее тест, тем выше вероятность того, что положительные результаты теста подтверждают наличие в пробе искомого вируса, т.е. предполагаемый диагноз.